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无菌技术学习心得

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  下面就是小编带来的无菌技术学习心得,希望能帮助大家!

  无菌技术学习心得1

  无菌操作基本技术

  1.在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。有关数据的计算要事先做好。根据实验要求,准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放于操作场所(培养室、超净台)内,然后开始消毒,以避免往返拿取造成污染机率增大。

  超净工作台台面每次实验前用75%酒精擦拭,按照顶板→侧壁→器械→挡风玻璃→操作台面的顺序对超净台内部进行彻底的消毒。然后开启超净台和无菌培养室的紫外灯照射30min,关闭紫外,启动风机运转15分钟后,方可开始实验操作。在工作台面消毒时切勿将培养细胞和培养用液同时照射紫外线。

  2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置,其它实验用品用完即应移出,以利于气流流通。实验用品以75 % 酒精擦拭后放入无菌操作台内。实验操作应在台面中央的无菌区域,勿在边缘之非无菌区域操作。

  3. 小心取用无菌实验物品,避免造成污染。勿碰触吸管尖端或容器瓶口,亦不要在开口容器的正上方操作。容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45°角取用。

  4. 操作人员应注意自身安全,须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作,并选择适当等级的无菌操作台。操作过程中,应避免引起气溶胶的产生,小心毒性药品,例如DMSO,并避免尖锐针头的伤害等。

  5. 每次操作只处理一株细胞株,且即使培养基相同也不共享培养基,以避免失误混淆或细胞间污染。为拿取方便,工作台面上的用品要有合理的布局,原则上应是右手使用的东西放置在右侧,左手用品在左侧,酒精灯置于中央。工作由始至终要保持一定顺序性,组织或细胞在未做处理之前,勿过早暴露在空气中。同样,培养液在未用前,不要过早开瓶;用过之后如不再重复使用,应立即封闭瓶口。

  6. 实验完毕后,关闭超净台风机,以75 %酒精擦拭操作台面及其他实验物品,将多余的物品拿出超净台,打开风机运转15 min,关闭风机并打开紫外灯照射30min。

  7. 定期检测CO2 钢瓶的CO2 压力 ; CO2 培养箱的CO2 浓度、温度、水盘是否有污染(水盘的水为无菌水,每周更换);定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜,预滤网(300小时/预滤网,3000 小时/HEPA)。

  预防是防止细胞培养过程中发生污染的最好办法。只有预防工作做在前,才能将发生污染的可能性降到最小程度。

  一般预防可从以下几方面着手:

  1、添加抗生素

  2、从物品、用品消毒灭菌着手

  (1)细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底,各种溶液灭菌除菌要仔细,并在无菌试验阴性后才能使用。

  (2)操作室及剩余的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。

  3、从操作者做起

  (1)进无菌室前要用肥皂洗手,按规定穿隔离衣。工作开始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。

  (2)操作者动作要轻,必须在火焰周围无菌区内打开瓶口,并将瓶口转动烧灼。操作时尽量不要谈话,若打喷嚏或咳嗽应转向背面。

  (3)操作时要常更换吸管,一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。实验完毕用消毒水浸泡的纱布擦台面。

  4、防止细胞交叉污染

  (1)在进行多种细胞培养操作时,所用器具要严格区分。吸取营养液、PBS、细胞悬液

  及其它各种用液时,均应分别使用吸管,不能混用,以防扩大污染或导致细胞交叉污染。

  (2)在进行换液或传代操作时,手或注射器、滴管等不能经过开口瓶口上方,不能触及瓶口,以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。加液时如吸管尖碰到瓶口,则应将吸管丢掉。

  (3)细胞一旦购置或从别处引入,均应及早留种冻存,一旦发生污染可重新复苏培养。

  5、无菌室的彻底消毒

  (1) 0.1%新洁尔灭全面彻底擦洗无菌室;

  (2)甲醛熏蒸法:甲醛是一种广谱灭菌剂菌,其水溶液和气休对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。

  容器破碎及感染性物质的溢出的处理:

  1 小玻璃瓶及其他容器等被传染性物质污染的破碎物品,以及培养物等溅洒的传染性物质,应当立即佩戴手套用布或纸巾覆盖。

  2 在上面倒上消毒剂,并使其作用适当时间。

  3 清理破碎物品及污染物,再用消毒剂擦拭污染区域。

  4 用于清理的布等应当放在盛放污染性废弃物的容器内。

  5 如果实验表格或其他材料被污染,在妥善转抄或拷贝后,应当将其弃入污染废弃物容器。


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